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說到RNA提取試劑盒你對它真的了解了嗎?

 更新時間:2022-07-23 點擊量:805
 
  RNA提取試劑盒用于從細胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解樣品后,加入氯仿,溶液分為無色水相和粉紅色有機相,RNA在水相中;用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比,該試劑盒裂解能力強、提取量高、專一性強,應用范圍廣。
  RNA提取試劑盒其主要特征在于分離裝置中采用纖維素為固相載體,利用融合蛋白CBD-SA作為生物橋聯(lián)劑,以生物特異性偶聯(lián)法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的物理吸附法和化學鍵合法活化纖維素固相載體,活化后的固相載體能夠高效率的結合生物素化的試劑,可用于蛋白或核酸的分離。構建cDNA文庫、蛋白質的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常常需要從總RNA中分離mRNA,mRNA只占總RNA的1%左右,但由于帶poly(A)尾巴,所以可以通過與Oligo(dT)的親和結合而與其RNA(如rRNA、tRNA等)分離開。
  RNA提取試劑盒使用方法:將0.5mL結合液加入到一管裝有1mgOligo(dT)纖維素的離心管中,放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃5分鐘后加入等體積的結合液,轉移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中,顛倒混勻數次,離心后將上清轉移到一個離心管中。用0.5mL結合液,混勻后4℃200g離心5分鐘,小心棄上清。重復上步洗3-5次,用RNase-free水洗脫mRNA,用微量核酸沉淀劑沉淀回收mRNA。