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細胞增殖檢測(MTT檢測)服務(wù)

 發(fā)布時間:2019/2/28 點擊量:1858

MTT實驗方法簡介
       MTT法,是一種檢測細胞存活和生長增殖的方法。
       檢測原理:活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO )能溶解細胞中的甲瓚,用酶標儀在490nm波長(或其他波長)處測定其光吸收值,在一定細胞數(shù)量范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值(OD值),來判斷活細胞數(shù)量,OD值越大,細胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。
       該方法靈敏度高、經(jīng)濟實用,已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模藥物篩選、細胞毒性試驗以及細胞放射敏感性測定等等。
 
 
操作方法
貼壁細胞
1、收集對數(shù)期細胞,調(diào)整細胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調(diào)密度1000-10000孔,(邊緣孔用無菌PBS填充)。
2、5%CO2,37℃孵育,細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物,原則上,細胞貼壁后即可加藥,或兩小時,或半天時間,但我們常在前一天下午鋪板,次日上午加藥.一般5-7個梯度,每孔100ul,設(shè)3-5個復孔.建議設(shè)5個,否則難以反應(yīng)真shi情況
3、5%CO2,37℃孵育16-48小時,倒置顯微鏡下觀察。
4、每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng),可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5、終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
6、每孔加入150ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
7、同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)
 
懸浮細胞
1、收集對數(shù)期細胞,調(diào)節(jié)細胞懸液濃度1×106/ml,按次序?qū)ⅱ傺a足的1640(無血清)培養(yǎng)基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培養(yǎng)液稀釋 l?g/ml,需預試尋找*稀釋度,1:10-1:20);③需檢測物10ul;④細胞懸液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(邊緣孔用無菌水填充)。每板設(shè)對照(加100?(儲存液100 1640)。
2、置37℃,5%CO2孵育16-48小時,倒置顯微鏡下觀察。
3、每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),繼續(xù)培養(yǎng)4 h。(懸浮細胞推薦使用WST-1,培養(yǎng)4 h后可跳過步驟4),直接酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm(630nm校準)測量各孔的吸光值)
4、離心(1000轉(zhuǎn)x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm(630nm校準)測量各孔的吸光值。
5、同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜),每組設(shè)定3復孔。
 
結(jié)果示例
 
 
客戶提供
1、實驗信息,包括細胞類型,細胞處理藥物和條件。
2、實驗結(jié)果要求等。
  
服務(wù)流程
1、提交項目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團隊討論項目細節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見對實驗方案進行修改。
4、雙方均滿意并達成一致,簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開展實驗,按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題,提供實驗原始結(jié)果和分析結(jié)果、實驗流程、實驗條件等等。
  
我們的優(yōu)勢
1、多種細胞類型供實驗需要,包括各種腫瘤細胞系,基因敲除細胞等等。
2、專業(yè)的操作人員。
3、高規(guī)格實驗室。
4、數(shù)據(jù)結(jié)果交付周期快。
 
咨詢與訂購
感謝您選擇我們的服務(wù),如果您有任何問題,請聯(lián)系我們,我們將竭誠為您解答和服務(wù)。

 

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