產(chǎn)品名稱：原代乳腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基（Human Mammary Epithelial Cell Medium）
產(chǎn)品說(shuō)明：原代乳腺上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基（Human Mammary Epithelial Cell Medium）是一種促進(jìn)人乳腺原代上皮細(xì)胞體外生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。該產(chǎn)品是一種無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有維持目的細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物以及生長(zhǎng)因子等。培養(yǎng)基基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個(gè)合適的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人乳腺原代上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)增。


產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近

使用說(shuō)明：
?使用前準(zhǔn)備
（1）15mL無(wú)菌離心管、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺(tái)中紫外照射30min。
（2）提前30min從4℃冰箱取出*培養(yǎng)基平衡至室溫，提前從-20℃冰箱取出所需體積的細(xì)胞外基質(zhì)膠冰上融化。
?乳腺原代細(xì)胞培養(yǎng)
（1）采用預(yù)冷的DMEM/F12培養(yǎng)基將細(xì)胞外基質(zhì)膠（Corning#356231）按1∶ 50比例稀釋，至少提前30min 將稀釋后的基質(zhì)膠預(yù)鋪在培養(yǎng)瓶/板底部表面，并使其*覆蓋底部表面，30~60 min后吸干備用。
（2）將分離并計(jì)數(shù)后的細(xì)胞懸液參考表1中細(xì)胞數(shù)量接種于培養(yǎng)瓶/板，補(bǔ)加*培養(yǎng)基至所需體積，輕輕搖晃混勻，表面消毒后放置于培養(yǎng)箱，37℃、5%CO2條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
（3）原代細(xì)胞初次接種后2-3天內(nèi)勿動(dòng)（利于細(xì)胞貼壁）。

?原代乳腺上皮細(xì)胞傳代
（1）鏡下觀察細(xì)胞形成克隆，且匯合度達(dá)80~90%時(shí)即可傳代。
（2）培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，棄去舊培養(yǎng)液，加入適量TrypLE*Express酶（Gibco#12605010）37℃孵育，10~20min后取出，輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。
（3）細(xì)胞消化至細(xì)胞變圓并開(kāi)始脫落時(shí)用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，室溫，300g，離心5min。
（4）棄上清，以1-2mL*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，活細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于預(yù)鋪有基質(zhì)膠的培養(yǎng)瓶/板底部，預(yù)鋪方法同上。
（5） 補(bǔ)加*培養(yǎng)基至所需體積，輕輕搖晃混勻，表面消毒后置于培養(yǎng)箱，37℃、5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：